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Fludarabina- (C2-metilhidroxifosforamida)- [anti-IGF-1R]: Síntese e citotoxicidade antineoplásica seletivamente dirigida contra o adenocarcinoma pulmonar (A549)

Coyne CP e Lakshmi Narayanan

Fludarabina- (C2-metilhidroxifosforamida)-[anti-IGF-1R]: Síntese e citotoxicidade antineoplásica seletivamente “direcionada” contra o adenocarcinoma pulmonar (A549)

Introdução: Muitos, senão a maioria, dos quimioterápicos convencionais de pequeno peso molecular são altamente potentes contra muitas formas de doenças neoplásicas. Infelizmente, a maior parte de uma dose administrada difunde-se involuntariamente de forma passiva em tecidos normais e sistemas de órgãos saudáveis ​​após administração intravenosa. Uma estratégia para aumentar a potência e reduzir as sequelas de dose limitada é a entrega seletiva “direcionada” de agentes quimioterápicos convencionais .

Materiais e Métodos: A fludarabina-(C2-metilhidroxifosforamida)-[anti-IGF-1R] foi sintetizada pela reação inicial da fludarabina com uma carbodiimida para formar um intermediário éster de fosfato de carbodiimida de fludarabina que foi posteriormente reagido com imidazol para criar uma fludarabina reativa com aminas - Intermediário (C2-fosforilimidazolida). A imunoglobulina monoclonal anti-IGF-1R foi combinada com o intermediário fludarabina-(C2-fosforilimidazolida) reativo a amina, resultando na síntese do imunoquimioterápico covalente fludarabina-(C2-metilhidroxifosforamida)-[anti-IGF-1R ] . A fludarabina residual e os reagentes que não reagiram foram removidos por microfiltração em série (MWCO 10.000) e monitorizados por HP-TLC à escala analítica. A avidez de ligação ao IGF-1R retida da fludarabina-(C2-metilhidroxifosforamida)-[anti-IGF-1R] foi estabelecida por ELISA celular utilizando células de adenocarcinoma pulmonar (A549) que sobre-expressam IGF-1R e EGFR. A potência citotóxica antineoplásica da fludarabina-(C2-metilhidroxifosforamida)-[anti-IGF-1R] foi determinada contra o adenocarcinoma pulmonar (A549) utilizando uma metodologia de coloração de vitalidade baseada em MTT.

Resultados: O índice de incorporação molar da fludarabina para a fludarabina-(C2-metilhidroxifosforamida)-[anti-IGF-R1] foi de 3,67:1, enquanto que a fludarabina ligada não covalentemente não foi detectada pela escala analítica HP-TLC após microfiltração em série. A separação de tamanhos fludarabina-(C2-metilhidroxifosforamida)-[anti-IGF-1R] por SDS-PAGE com autorradiografia quimioluminescente apenas detetou uma única banda de 150 kDa. Cell-ELISA da fludarabina-(C2-metilhidroxifosforamida)-[anti-IGF-1R] medindo a imunoglobulina total ligada às membranas da superfície externa do adenocarcinoma pulmonar (A549) aumentou com as elevações