Revista de Nanomateriais e Nanotecnologia Molecular

Preparação de anticorpo anti-elastase conjugado com pontos quânticos de 710 nm e isotiocianato de fluoresceína para imunoensaio de células somáticas do leite

Zlatina Becheva e Tzonka Godjevargova

Preparação de anticorpo anti-elastase conjugado com pontos quânticos de 710 nm e isotiocianato de fluoresceína para imunoensaio de células somáticas do leite

Um novo método microscópico de imunofluorescência para contagem de neutrófilos e células somáticas foi desenvolvido usando anticorpo anti-elastase. Dois conjugados diferentes - anticorpo anti-elastase de neutrófilos bovinos-conjugado de isotiocianato de fluoresceína e anticorpo anti-elastase de neutrófilos bovinos-conjugado Quantum Dots 710nm foram preparados. O acoplamento de Quantum Dots (QDs) e isotiocianato de fluoresceína (FITC) ao anticorpo foi demonstrado pela comparação de espectros de absorção ultravioleta e espectros de fluorescência do conjugado e componentes iniciais. As atividades dos conjugados foram medidas por ELISA indireto nas mesmas condições. Foi descoberto que a sensibilidade do imunoensaio com conjugado QDs foi maior do que a sensibilidade do imunoensaio com conjugado FITC. A estabilidade de armazenamento do anticorpo antielastase de neutrófilos bovinos-conjugado QDs710nm e do anticorpo antielastase de neutrófilos bovinos-conjugado FITC foi estudada. A intensidade de fluorescência residual do anticorpo antielastase-QDs foi de 95% no 30º dia, enquanto a intensidade do anticorpo antielastase-conjugado FITC foi reduzida para 60% no mesmo dia. Os conjugados obtidos foram aplicados em teste real com células somáticas de leite bovino. A imagem de fluorescência provou que o conjugado QDs tem melhor intensidade de fluorescência do que o conjugado FITC e é mais apropriado para determinação de células somáticas no leite.