Jornal de Técnicas Imunológicas e Doenças Infecciosas

Otimização do ensaio de fluxo lateral para deteção de morbilivírus canino e aplicação da tira como substituto de amostra

Monu Karki*, KK Rajak, Praveen Singh, Arfa Fayaz, Kiran, Mukesh Bhatt, Vishal Rai, Chris Einstein, Ajay Kumar Yadav e RP Singh

A esgana canina é uma doença emergente, causada pelo morbilivírus canino (CDV) da família Paramyxoviridae. O vírus evoluiu como um agente patogénico multi-hospedeiro, uma vez que afeta muitas espécies de animais selvagens. O desenvolvimento de testes de diagnóstico específicos e sensíveis é a necessidade de um programa de controlo. Estão disponíveis vários testes de diagnóstico para a deteção de antigénio e anticorpo de CDV. O Ensaio de Fluxo Lateral (LFA) é o teste de diagnóstico de ponto de atendimento mais promissor devido à sua especificidade, fácil utilização e resultado instantâneo. Este estudo foi desenhado para desenvolver um ensaio de fluxo lateral utilizando o anticorpo monoclonal (mAb) desenvolvido internamente contra a proteína Nucleocapsídeo (N) do isolado ‘CDV/dog/bly/Ind/2018’, que representa as estirpes circulantes da Índia. Os dois mAbs incluídos no estudo apresentaram uma elevada afinidade de ligação no ELISA indireto e no ensaio dot blot. Dos dois, foi selecionado um mAb devido à sua afinidade de ligação comparativamente maior no formato LFA e menor ligação não específica à matriz biológica e aos componentes do tampão. As amostras clínicas frescas recolhidas no local foram claramente detectadas pelo LFA, enquanto as amostras armazenadas com um título reduzido do vírus apresentaram resultados inconsistentes. Além disso, as amostras de sangue mostraram uma distinção clara entre positivo e negativo do que o esfregaço e os homogeneizados de tecido. A extração de RNA da tira foi bem-sucedida com algumas modificações no método de extração de RNA Trizol e os fragmentos dos genes N e H foram amplificados. Assim sendo, o estudo conclui que o LFA é adequado para a deteção de antigénio de CDV em condições de campo e as tiras podem ser utilizadas como substituto de amostra para estudo molecular.