Jornal de Técnicas Imunológicas e Doenças Infecciosas

O estabelecimento da reação em cadeia da polimerase quantitativa fluorescente em tempo real (PCR) para a deteção do vírus da gripe aviária altamente patogénica, subtipo H5N1

Miao-lian Tan, Yuan-yuan Niu, Wei Shui, Jiancong Lin, Ming Li e Changran Zhang

As estirpes altamente patogénicas do vírus da gripe aviária (AIV), que são vírus da gripe A, causam doenças graves nas aves domésticas e nos humanos. O objetivo deste estudo foi estabelecer um ensaio RT-PCR quantitativo fluorescente para deteção do subtipo H5N1 do vírus da gripe aviária (AIV) altamente patogénico. Os conjuntos de sondas específicas dos subtipos H5 e N1 foram desenvolvidos com base em sequências do vírus da gripe aviária detetadas na China. Dois pares de primers e duas sondas fluorescentes foram rigorosamente desenhados e otimizados num sistema de reação. De acordo com a quantidade de RNA plasmidial extraído das estirpes H5N1, foi traçada a curva padrão DWQBGWDWQBGW da PCR quantitativa fluorescente e todas as amostras foram depois testadas através de PCR em tempo real. O teste do AIV altamente patogénico subtipo H5N1 foi identificado como específico e o seu nível de sensibilidade foi de 102~103 cópias/reacção. A curva padrão foi realizada a 109~105 cópias/reacção de ADN. Foram necessárias apenas três horas desde a extração do RNA viral até à conclusão do teste. O ensaio foi fácil de realizar e altamente reprodutível. Em conclusão, a PCR quantitativa fluorescente, aqui descrita, fornece um método rápido, específico e sensível para detetar não só os genes H5, mas também o N1.