Jornal de Biologia Molecular e Métodos

Comparação da determinação do sexo fetal de rato utilizando gDNA e mRNA da placenta via qRT-PCR

Anthony L Su e Rita Loch-Caruso

Existe uma necessidade crescente de considerar o sexo fetal como uma variável biológica e de avaliar com precisão os efeitos específicos do sexo. Entre os vários métodos utilizados para determinar o sexo fetal, a reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qRT-PCR) de Sry (região determinante do sexo Y) com ADN genómico (gDNA) é comummente utilizada, para além da utilização de metodologias como a transcriptómica e a detecção de corpos de Barr. No entanto, o RNA mensageiro Sry (mRNA), um produto do SrygDNA, não foi previamente avaliado para a determinação do sexo. Utilizando amostras de placenta de ratas Wistar grávidas no dia gestacional (GD) 16, este estudo avaliou a compatibilidade da deteção de Sry utilizando gDNA versus mRNA para determinar o sexo fetal. As amostras utilizadas neste estudo atual provêm de um estudo maior que investigou a toxicidade reprodutiva do tricloroetileno (TCE) e a potencial modulação pela N-acetil-L-cisteína (NAC) e pelo ácido aminooxiacético (AOAA). Em 90 das 91 amostras, a classificação sexual determinada pelo gDNA correspondeu à classificação sexual determinada pela análise do mRNA dos valores Sry (Sry/B2m). Tanto para o gDNA como para o mRNA, foram observadas diferenças estatisticamente significativas nos valores de Sry/B2m entre homens e mulheres com amostras consideradas na totalidade e quando as amostras foram separadas por grupos de tratamento (todas as comparações foram p<0,01 ou abaixo, e todas as comparações, exceto duas, foram p <0,001 ou abaixo). Por fim, foi também discutida a validade da utilização dos valores de SryCq para determinar o sexo fetal e o gene de referência B2m. Em conjunto, este estudo sugere que a determinação do sexo fetal em ratos Wistar pode ser realizada utilizando medições de Sry em gDNA ou mRNA com resultados altamente compatíveis.