Jornal Internacional de Pesquisa Cardiovascular

O denosumabe pode ser um potencial inibidor da calcificação das células intersticiais valvulares in vitro

Daniel Alejandro Lerman, Sai Prasad e Nasri Alotti

O denosumabe pode ser um potencial inibidor da calcificação das células intersticiais valvulares in vitro

Objectivo: O denosumab é um anticorpo monoclonal totalmente humano e um novo agente antirreabsortivo que atua ligando o ativador do recetor do ligante do fator nuclear kappa-β (RANKL) e inibindo a cascata de sinalização que causa a maturação, atividade e sobrevivência dos osteoclastos. O nosso objetivo foi elucidar o efeito do Denosumab no processo de calcificação espontânea e induzida num modelo in vitro de células intersticiais valvulares de porco (VICs).

Materiais e Métodos: Os VICs foram extraídos de corações de porco frescos por digestão em série com colagenase. A calcificação espontânea dos VICs foi aumentada in vitro pela adição de Na ₃ PO ₄ (3 mM, pH 7,4) e diferentes concentrações (0,1, 1 e 10 ng/ml) de fator transformador de crescimento beta (TGFß). O grau de calcificação antes e após o tratamento com Denosumabe foi estimado pela coloração com Alizarin Red para a deposição de cálcio e pela coloração com Sirius Red para o colagénio. Foram utilizadas técnicas colorimétricas para determinar quantitativamente a deposição de cálcio e colagénio. Para a análise estatística foram utilizados o SPSS e o Microsoft Office Excel 2013.

Resultados: As VICs da aorta de porco in vitro foram induzidas a calcificar pela adição de Na 3 PO _{4 3} mM , apresentando um aumento de 5,2 vezes em 14 dias (P<0,001), ou Na ₃ PO ₄ 3 mM + 10 ng/ ml de TGFβ, apresentando um aumento de 7 vezes no Dia 14 (P<0,001). O denosumab inibiu a calcificação induzida por Na ₃ PO ₄ 3 mM e Na ₃ PO ₄ 3 mM com a adição de TGFß a 0,1, 1 ou 10 ng/ml até níveis basais apenas a uma concentração de 50 μg/ml (P< 0,001) .

Conclusão: Este estudo provou que o Denosumab pode ser um potencial inibidor da calcificação dos VICs in vitro . Uma compreensão mais completa das ações do Denosumab pode identificar uma nova estratégia terapêutica para a intervenção clínica contra a calcificação da válvula aórtica e a estenose aórtica .