Jornal de Fisiologia e Patologia Vegetal

基于 ITS 区序列的香蕉体外真菌污染物鉴定及系统发育分析

阿尼玛桑，D.A

植物组织培养为大量快速生产无病植物提供了一种手段，但真菌污染是其成功应用的主要制约因素。本研究根据间隔（ITS）区域序列对离体培养香蕉的真菌污染物进行了表征、鉴定和系统发育分析。从真菌污染物纯培养物中提取基因组 DNA。使用 ITS1 和 ITS4 引物进行聚合酶链式反应扩增和 Illumina 短序列分析。对核苷酸序列进行比对以获得共识，并使用基本局部比对搜索工具 (BLAST) 与 NCBI GenBank 进行比较。使用 MEGA 7 软件对相似性较高的序列进行序列分析，鉴定出五种曲霉菌、三种青霉菌、镰刀菌、木霉和枝孢菌各 1 种为污染物。真菌物种之间的总体遗传距离为 0.205，核苷酸替换的最大复合似然表明硫胺素最稳定。真菌以 0.10 的遗传距离聚类为三大类，再细分为五个簇。五种曲霉菌株的簇和亚簇；三种青霉菌株的主要簇；由厚垣镰刀菌和绿色木霉组成的簇；以及一种单独的真菌细枝孢菌。曲霉菌组与黄曲霉菌和帕里斯克罗蒂根菌在系统发育上相关，所鉴定的青霉菌属与柑橘青霉菌密切相关，而检测到的枝孢菌与细枝孢菌和多喙茎点霉一致。研究得出结论，真菌污染物的分子鉴定弥补了传统方法的缺陷，所提供的信息可能有助于制定具体有效的灭菌方案，以最大限度地减少体外培养过程中的污染。