Mohammad M Hossain e Raymond R Rowland
As proteínas marcadas com histidina são frequentemente detectadas com anticorpos. As proteínas marcadas com histidina são frequentemente detectadas com anticorpos específicos para a marca de histidina; estes são úteis em estudos imunológicos. Foi utilizado um anticorpo monoclonal penta-His (mAb) para estimar a quantidade relativa de proteína recombinante ligada a cada conjunto de microesferas num imunoensaio de microesferas fluorescentes (FMIA). Neste estudo, a utilização do mAb anti-His para a deteção de antigénios recombinantes de sete vírus animais diferentes: vírus da síndrome reprodutiva e respiratória suína (PRRSV), circovírus suíno tipo 2 (PCV2), vírus da gripe suína (SIV), vírus da peste suína africana ( PSA), vírus da peste suína clássica (VPSC), vírus da diarreia viral bovina (BVDV) e vírus da febre do Vale do Rift (RVFV) ligados a esferas de microesferas após acoplamento foram testados. As proteínas foram produzidas como proteína de fusão 6xHis-ubiquitina e acopladas covalentemente ao poliestireno Luminex MagPlex®, esferas de microesferas carboxiladas. Os antigénios alvo foram montados num único multiplex e testados na presença de mAb anti-marca His. Os resultados foram reportados como intensidade fluorescente média (MFI). A interação entre antigénios recombinantes marcados com His e mAb anti-marca His foi testada utilizando o peptídeo bloqueador de marca His. Os resultados do ensaio de bloqueio de His mostraram que 1 μg / ml de peptídeo bloqueador de His pode inibir completamente a interação de antigénios marcados com His e anti-HismAb. Os valores de MFI para as amostras de soro negativas apresentaram uma redução de 10-40 vezes em comparação com os soros positivos para PRRSV-N, PCV2, SIV, ASFV, CSFV e BVDV. Portanto, a utilização do mAb anti-His proporciona um meio conveniente para avaliar a ligação do antigénio às esferas.
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