Jornal de Ciência Veterinária e Diagnóstico Médico

Desenho de técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) para deteção de causas específicas de tuberculose (TB) em bovinos leiteiros e humanos

Hossain MZ, Rima UK, Islam MS, Habib MA, Chowdhury MGA, Saha PC, Chowdhury EH e Khan Mahna

Desenho de técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) para deteção de causas específicas de tuberculose (TB) em bovinos leiteiros e humanos

A tuberculose (TB) em bovinos e humanos é causada por M. bovis, M. tuberculosis e M. avium subsp. var Paratuberculosis (M. paratuberculosis). Bovinos leiteiros selecionados (N = 700) e humanos (N = 20) foram testados através de testes tuberculínicos e imagens de raios X. A biópsia aspirativa de gânglios pré-escapulares de bovinos com teste tuberculínico positivo e urina, tosse, líquido pleural e peritoneal de humanos suspeitos foi testada posteriormente através da coloração de Ziehl Neelsen. O ADN genómico de bovinos com teste tuberculínico positivo (N = 23) e de humanos suspeitos (N = 20) foi testado utilizando reações em cadeia da polimerase multiplex (PCR) visando o 16srRNA (1030 pb, 180 pb). Os resultados mostraram que 23 bovinos e 11 humanos foram infectados com TB. Para detetar a infectividade devida a M. bovis e M. tuberculosis amostras selecionadas de bovinos (N = 11) e humanos (N = 11) foram testadas em PCR uniplex visando os genes MPB83 (600 pb) e H37Rv Rv3479HP (667 pb), respectivamente. Os resultados da PCR mostraram que todas as amostras bovinas e sete humanas geraram um amplicon de 600 pb específico do gene MPB83. Dois ADNs bovinos e sete humanos geraram amplicons de 667 pb específicos do gene H37Rv Rv3479HP. Sete bovinos foram infectados por M. bovis e dois por M. tuberculosis. Dois bovinos estavam co-infectados com M. bovis e M. paratuberculosis. Quatro humanos foram infectados com M. bovis e sete com M. tuberculosis. O gene MPB83 é invariavelmente partilhado por M. bovis e M. tuberculosis. O protocolo de PCR desenvolvido visando o fragmento do gene H37Rv Rv3479HP (667pb) é seletivo para o M. tuberculosis. Os resultados da sequenciação mostraram mutação pontual nos genes 16srRNA, MPB83 e H37Rv Rv3479HP. As análises filogenéticas dos genes selecionados de M. bovis e M. tuberculosis mostraram que os organismos pertenciam à Linhagem 1. O teste tuberculínico intradérmico e a baciloscopia não conseguiram diferenciar a infectividade por M. bovis ou M. tuberculosis. A técnica de PCR concebida parece específica para o M. tuberculosis, pode ser utilizada para detetar causas de TB em mamíferos e conceber futuras estratégias preventivas em conformidade.