Jornal de Ciência Veterinária e Diagnóstico Médico

Desenvolvimento de ensaio imunoabsorvente enzimático baseado em proteína de nucleocapsídeo recombinante para deteção serológica da doença de disenteria de inverno

Kanokwan Singasa, Taweesak Songserm, Preeda Lertwatcharasarakul, Siriluk Jala, Sakuna Phattanakunanan e Pipat Arunvipas

A Doença da Disenteria de Inverno é uma doença viral aguda e contagiosa que afeta negativamente o gado leiteiro nas explorações agrícolas na Tailândia. Um ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) baseado na proteína recombinante do nucleocapsídeo (rN) que foi desenvolvido para a deteção de anticorpos contra a doença de disenteria de inverno foi produzido por um sistema de expressão proteica de Escherichia coli. A proteína N do antigénio epítopo foi concebida utilizando fragmentos quase totais do gene N (8-430 aa, gene N). Foi identificado que tem aproximadamente 48 kDa como a proteína rN e pode ligar-se ao soro positivo de bovinos de leite para o coronavírus bovino por análise de Western blot. As condições do método ELISA foram otimizadas. A proteína rN foi padronizada com uma concentração de antigénio de revestimento de 5 μg/poço. A proteína rN foi testada com soros em bovinos leiteiros infectados e não infectados. A diluição dos anticorpos primários foi identificada como 1:50, utilizando uma titulação em tabuleiro de xadrez. Os intra e inter-ensaios foram repetíveis. O ponto de corte do valor de DO450 corrigido da média ± 2DP (desvios padrão) foi estabelecido em 0,049. A percentagem de especificidade, sensibilidade e precisão entre o rNELISA desenvolvido e um kit SVANOVIR® BCV-Ab ELISA foi de 96,3, 84,8 e 86,1%, respetivamente. O valor kappa de Cohen do ELISA desenvolvido em comparação com o kit de teste comercial foi de 0,71. O coeficiente de correlação dos valores de absorvância destes dois testes foi de 0,68. O método ELISA da proteína do nucleocapsídeo recombinante pode ser útil para o diagnóstico e vigilância do coronavírus bovino.