Jornal de Ciência Veterinária e Diagnóstico Médico

Investigação de estirpes do vírus da bronquite infecciosa por RT-PCR em tempo real e sequenciação do gene S1 em frangos de carne

Engin Alp Onen e Yakut Ozgur

Neste estudo, pretendeu-se a deteção do vírus da bronquite infeciosa (IBV) em amostras de esfregaços traqueais de galinha por RT-PCR em tempo real, que foi reportado como um método de deteção de vírus rápido e sensível. Foram determinadas relações filogenéticas em diferentes estirpes variantes e de campo do IBV através da sequenciação de regiões hipervariáveis ​​(HVRs) do gene S1 do IBV. Foram retirados zaragatoas traqueais de 120 frangos de carne com sinais respiratórios, aleatoriamente. As amostras foram inoculadas nos fluidos alantóides (AF) de ovos embrionados de galinha SPF. Os RNAs foram extraídos por AF. Os RNAs foram traduzidos em cDNAs ss. A RT-PCR em tempo real foi realizada com a sonda Taqman duplamente marcada, pares de iniciadores IBV 5 GU391 e IBV5 GL533. Foram obtidos resultados positivos em 33 amostras de 120 (27,5%) por RT-PCR em tempo real. Os cDNAs das amostras positivas foram utilizados para a amplificação dos HVRs (Hyper Variable Regions) na região do gene S1 com os primers C2U e Ag0723. As amostras foram também amplificadas pelos iniciadores S1 5’mod e CK2. Os produtos de RT-PCR foram sequenciados diretamente. Os resultados da sequenciação foram comparados com a base de dados de nucleótidos do NCBI. Os resultados da sequenciação foram comparados com algumas estirpes variantes do IBV na base de dados de bancos de genes a uma taxa de 72-86%. Estes resultados suportam que estamos perante estirpes variantes do IBV. Além disso, observámos muitas mutações de SNP alinhadas. Este estudo mostra que as aves podem ser infetadas por estirpes variantes do IBV a uma taxa de 27,5%, embora tenham sido vacinadas com uma vacina do tipo clássico. Estes resultados demonstram que a vacinação por estirpes vacinais clássicas de IBV não pode proporcionar protecção cruzada suficiente contra estirpes variantes. Por isso, ainda ocorrem surtos da doença em rebanhos vacinados. Além disso, verificámos que estes iniciadores não são suficientes para que todas as estirpes de campo do IBV sejam sequenciadas e classificadas. Assim, devem ser desenvolvidos diferentes primers e utilizados mais do que dois pares de primers. Nesta experiência, verificámos que a carga viral é maior na FA do que nas amostras de esfregaço devido à replicação do IBV na FA do ovo SPF. Observámos nanismo e hemorragias em embriões de pintos com 14 dias de idade