Jornal de Ciência Veterinária e Diagnóstico Médico

Determinação simultânea de triptofano, quinurenina e niacina em soro de vacas leiteiras periparturientes por cromatografia líquida de alta performance com deteção de arranjo de díodos

Liane Hüther, Julia Hartwiger, Caroline Drong, Ulrich Meyer e Sven Dänicke

Determinação simultânea de triptofano, quinurenina e niacina em soro de vacas leiteiras periparturientes por cromatografia líquida de alta performance com deteção de arranjo de díodos

O triptofano é um aminoácido essencial e substrato para importantes vias bioquímicas, por exemplo, gerando o neurotransmissor serotonina ou construindo quinurenina e nicotinamida através da via da quinurenina, que pode ser induzida pela enzima triptofano 2,3-dioxigenase (TDO) através de hormonas glicocorticóides ou pela indolamina 2 ,3-dioxigenase (IDO) após ativação imunológica. Uma vez que a proporção de quinurenina para triptofano é considerada um indicador de um sistema imunitário ativado, desenvolvemos um método analítico para a determinação simultânea de quinurenina, triptofano e nicotinamida no soro através de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) e avaliámos a sua adequação como marcadores inflamatórios em vacas leiteiras. Os parâmetros de validação demonstraram que o método HPLC cumpre os requisitos para a análise de rotina do triptofano e dos seus metabolitos quinurenina e nicotinamida no soro com elevada linearidade dentro dos respetivos intervalos de trabalho e limites de quantificações de 0,41 µmol L-1 para a nicotinamida, 0,43 µmol L-1 para a quinurenina e 3,40 µmol L-1 para o triptofano. As variações intradiárias e interdias foram de 2,3 e 3,6% (nicotinamida), 3,1 e 6,3% (quinurenina) e 1,9 e 5,2% (triptofano), respetivamente. A degradação do triptofano através da via da quinurenina foi investigada em 10 vacas leiteiras periparturientes de dois grupos alimentares durante o período de transição. O curso das concentrações de triptofano no soro da vaca perto do parto foi semelhante ao encontrado nas mulheres grávidas, com uma diminuição até ao nascimento, seguida de concentrações de triptofano pós-parto aumentadas e normalizadas. No entanto, o aumento das concentrações de quinurenina e uma inclinação simultânea da proporção de quinurenina para triptofano durante a gestação não puderam ser confirmados no nosso estudo, para além de um pico da proporção de quinurenina para triptofano no parto, que pode ser devido à ativação do TDO hepático induzida pela hormona do stress. Medições adicionais de interferão-γ e glicocorticóides como supostos indutores de TDO e IDO seriam úteis para verificar a adequação da proporção de quinurenina para triptofano como marcador imunológico em bovinos.